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海藻糖6磷含量试剂盒,海藻糖检测试剂盒 |
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海藻糖6磷含量试剂盒
测定意义：
海藻糖又称为漏芦糖、蕈糖，是由两个葡萄糖分子组成的一个非还原性双糖，能够在高温、高寒、高渗透压及干燥失水等恶劣环境条件下在细胞表面形成特的保护膜，有效地保护生物分子结构不被破坏，从而维持生命体的生命过程和生物特征。
植物体内主要以葡萄糖为底物合成海藻糖，海藻糖-6-磷酸酯酶 （trehalose 6-phosphate phosphatase，TPP）是该途径中海藻糖合成关键酶之一，该反应在海藻糖-6-磷酸合成酶（trehalose-6-phosphate synthase，TPS）的作用下，催化尿苷二磷酸葡萄糖（UDPG）和 6-磷酸葡萄糖生成中间产物6-磷酸海藻糖，再在TPP的作用下去磷酸化，生成海藻糖。
注 意：
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定原理：
TPP 催化海藻糖-6-磷酸产生海藻糖，同时释放出磷酸根，使用钼锑抗比色法测定。
需自备的仪器和用品：
酶标仪、水浴锅、可调式移液器、96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
样品测定的准备：
1、细菌或细胞的处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3S，间隔 10S，重复 30 次）；8000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织的处理：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入1mL 提取液），冰浴中匀浆。8000g ，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
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